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奶牛胚胎移植实用技术的研究

时间:2011-11-07 10:43:08   来源:淘牛网   作者:佚名    点击:2594次

摘要 笔者于1995—1997年进行了为期3年的奶牛胚胎移植实用技术的研究。3年共移植奶牛胚胎137枚,受胎率为 35.77%(49/137)。移植 A级胚胎的受胎率为 70%(7/10),移植B级胚胎的受胎率为43.02%(37/86),移植C 级胚胎的受胎率为 12.19%(5/41)。移植A级胚胎的受胎率比移植B级胚胎的受胎率高26.98%(P>0.05);移植A级胚胎和B级胚胎的受胎率分别比移植C 级胚胎的受胎率高 57.81%(P>0.01)和30.83%(P>0.01)。

关键词 奶牛 胚胎移植

    受率牛胚胎移植技术近年来在国内外发展较为迅速,尤其是畜牧业发达国家,已将该技术转化为生产力,经营胚胎移植的商业性机构纷纷建立,胚胎移植技术已作为常规育种的重要手段,其配套的器械、设备在一些国家形成了新的产业。而我国奶牛胚胎移植的试验报道虽较多,但还存在很多问题,主要是移植受胎率偏低,还不能在生产中广泛推广应用。如何结合我国的实际情况,缩短我们与世界发达国家的距离,尽快将这一技术在生产中应用,是摆在广大畜牧科技人员面前的巫待解决的问题。

    1材料与方法

    1.1试验材料

    1.1.1奶牛冷冻胚胎 由黑龙江省畜牧研究所提供。

    1.1.2 受体奶牛

    系黑龙江8511农场饲养的中国荷斯坦奶牛,1995—1996年按国内标准选择生殖器官正常、健康无疫病、无繁殖障碍的成年母牛作受体。1997年按日本金川弘司选择受体的标准:具有正常的发情情期(要有稳定的发情周期);受胎性(两次输精未受胎者不能作受体);连产性(2年产2胎),没有传染病、难产和繁殖障碍的病史[1]。3年共择符合移植标准的受体牛137头。

    1.2 试验方法

    1.2.l 受体牛的发情和黄牛的检查

    通过自然发情的方法选择符合条件的奶牛作受体。因奶牛胚胎为配种后第7天采集而后经冷冻而成,所以应选择配种后第7天的奶牛作受体。对受体奶牛在移植前要检查哪侧卵巢排卵及黄体的发育状态,以便确定是否可以移植。 1.2.2胚胎的鉴定

    根据胚胎的形态特征,将胚胎分为A、B、C、D 4个等硷亨香先在解剖镜下放大10-20倍进行观察,随后再放大至50-100倍进行进一步观察。其内容为:胚胎发育阶段与胚龄一致,卵裂球紧密充实,大小均匀成一整体,无游离细胞,界限明显,透明度好,透明带完整且圆。若是囊胚、胚结、滋养层细胞和囊胚腔均明显可见者为A级胚胎;胚胎发育阶段与胚龄基本一致,卵裂球基本结构比较紧密,但有个别细胞游离,透明度较好,透明带呈圆形者为B级胚胎;胚胎发育阶段与胚龄不太一致,细胞团松散,游离细胞较多,细胞界限模糊发暗者为C级胚胎,有碎片的细胞变性,没有细胞组织结构者为D级胚胎。A、B、C级胚胎可以移植,D胚胎为不合乎移植的胚胎。

    1.2.3奶牛冻胚的解冻及脱甘油的方法

    1995—1996年,笔者将胚胎从液氮中取出,直接浸入35-38℃恒温水浴中解冻12 S,而后将解冻的胚胎直接放入含有10 M、 0.5M和不甘油的20% FCS—PBS液的平皿内进行清洗胚胎3次,胚胎在每个平皿中停留5-10min,以便脱去胚胎冷冻时的甘油。1997年,笔者将胚胎自液氮中取出后,在室温空气中停留3-4S之后,再将其胚胎放入35-38℃恒温水浴中解冻12S,而后再将解冻的胚胎直接放入不含甘油的20% FCS-PBS液的平皿进行洗涤3次,胚胎在每个平皿内停留5-10min脱去胚胎之甘油,最后将镜检合格的胚胎(A、B、C级胚胎)装入清洗后的塑料移植管内备用。

    1.2.4 胚胎移植的方法

    采用直肠把握子宫颈输精法,将胚胎移植到配种后第7天的受体牛有黄体侧的子宫角内。

    2结果

    2.1胚胎移植的结果 3年共移植胚胎13澈,其受股率为35.77%(49/137)。

    2.2胚胎的质量

    解冻后的冻胚经鉴定为A级的胚胎10枚移植后的受胎率为70%(7/10);解冻后鉴定为B级的胚胎 86枚,移植后的受胎率为 43. 02% (37/86);C级为 41枚,移植后的受胎率为 12.19%(5/41)。

    2.3受体的选择方法不同,移植胚胎的效果也不同

    1995—1996年,笔者按国内选择受体的标准进行选择受体,胚胎移植的受胎率分别为 32.50%(13/40)和 34.55%(19/55)。1997年,笔者按日本金川弘司的方法选择受体,移植胚胎的受胀率为40.48%(17/42)。3年共选择符合移植的受体137头。

    2.4解冻冻胚脱甘油的方法直接影响胚胎的质量

    1995—1996年,笔者将胚胎自液氮中取出后,直接放入35—38℃的恒温水浴中进行解冻,但在试验中发现,胚胎易出观透明带破裂的现象。为克服这种现象,1997年将胚胎自液氮中取出,在室温空气中停留3-4S,而后再将其放入35-38℃的恒温水浴中解冻,取得较好的结果。1995—1996年不合格的胚胎14枚,透明带破损率为 92.86%(13/14)。 1997年不合格的胚胎8枚,透明带破损率为 25%(2/8)。1995—1996年,笔者按传统的方法将解冻好的胚胎放入含有1.0 M甘油,0.5 M甘油和不含甘油的20%FCS—PBS液清洗胚胎3次,移植胚胎的受胎率分别为32.26%(10/31)和 34.55%(19/55)。而 1997年笔者将解冻好的冻胚直接放入不含甘油的 20%FCS-PBS液中,清洗胚胎3次,受胎率提高到 40.48%(17/42)。

    2.5产犊与犊牛生长发育

    1995—1997年,共移植137枚胚胎,受胎率为35.77(49/37),除因喂发霉饲料流产3头和难产1头外,45头母牛已顺利分娩,目前所生犊牛生长发育良好。

    3讨论

    3.1胚胎的质量直接影响受胎率。解冻后的冻胚经鉴定为A级的10枚,移植A级胚胎的受胎率为 70%(7/10)。鉴定为B级胚胎86枚,移植 B级胚胎的受胎率为 43.02%(37/86)鉴定为C级的胚胎41枚,移植C级胚胎的受胎率为12.19%(5/41)。移植A级胚胎的受胎率比移植B级胚胎的受胎率高26.98%,差异不显著(P>0.05);移植A级胚胎率的受胎率和移植B级受胎率分别比移植C级胚胎的受胎率高57.81%和 30.83%,差异均为极显著(P<0.01。试验结果表明,胚胎的质量好坏是直接影响着移植后的受胎率。如果移植的A级胚胎能占70%,B级胚胎能占30%,那么移植后的受胎率能达到50%以上。

    3.2选择自然发情的母牛作受体,开始发情的时间往往出现差异,也影响受胎率。有的母牛发情症状不明显,但早已发情,有时因工作忙观察不细致,将早已发情的母牛误认为刚发情,由此发情开始的时间能错后1d左右。有少数母牛发情持续期不正常,超过2d以上,但移植的胚胎应在配种后第7天移植,发情持续期超过2d以上的母牛,排卵均比正常母牛晚1d以上。总之,上述两种情况均易使供体和受体发情开始时间之差超过24 h,故移植后的胚胎,其受胎率明显降低。

    3.3受体的选择方法不同,直接影响着胚胎移植的受胎率。1995-1996年,笔者按国内选择受体的标准选择受体,移植胚胎的受胎率分别为32.5%(13/40)和34.55%(19/55);1997年,笔者按日本金川弘司的方法选择受体,移植胚胎的受胎率提高到40.48%(17/42)。

    3.4由于技术人员操作熟练程度和农场连队条件较差,可能也会影响胚胎移植的效果。

    3.5由于试验头数尚少,仅供参考,有待于进行大量的试验和探讨。

 

(责任编辑:小磊)

 

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