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西门塔尔牛短期重复超排的效果与分析

时间:2011-11-01 10:41:25   来源:中国畜牧业协会牛业分   作者:佚名    点击:1982次

西门塔尔牛短期重复超排的效果与分析

    母牛的卵巢在出生时含有 20 万~ 40 万个卵母细胞,但在其生命过程中有 99 %的原始卵泡闭锁,仅有 1 %的可以发育成熟而排卵 [1] 。应用超数排卵技术可使每次排卵由 1 ~ 3 个增至 10 ~ 20 个,而通过重复超排,可充分发挥良种奶牛的繁殖潜力,对育种和快速扩群具有特别重大的意义。郭志勤等( 2001 ) [2] ,张居农等( 2005 ) [3] 呼格吉勒图( 2003 ) [4] 、付静涛等( 2002 ) [5] 、卢全晟等( 2003 、 2005 ) [6] [8] 、 马学海等( 2007 ) [7] 等,陈静波( 1992 ) [9] 的研究报道认为,采用外源激素重复超排,以非手术冲胚对中国荷斯坦牛、安格斯牛、海福特和娟姗母牛和内分泌和生殖道的刺激的影响较小,可以进行的多次重复 超排处理。为探讨重复超数排在西门塔尔母牛应用的效果及影响因素,本研究在北京日升德龙奶牛养殖公司牛场进行了实验,现将结果报告如下 。


1 材料与方法

1.1 供体母牛

    本实验选择 6 头年龄 4-9 岁, 2 胎 -6 胎健康,有正常的发情周期 , 无繁殖机能疾病,膘情中上等,品种为西门塔尔的经产母牛。母牛分娩 60d 以上,断乳,无流产史,性情温顺。直肠检查卵巢机能正常,子宫颈无明显弯曲,子宫角对称。

    供试母牛在开放式圈舍按奶牛的饲养管理标准饲喂,计算机控制精确给料,自由饮水。供体牛按饲养管理程序正常饲养,定时饲喂、挤奶,自由运动,每天三次饲喂,保证充足的微量元素,一次注射维生素 A 、 D 、 E 。

    母牛在超排前 2 个月进入固定胚胎采集与移植场地,单独组群、编号,保持饲养环境相对稳定。实验地为北京日升德龙奶牛养殖公司牛场。

1.2 供试药物与仪器设备

    FSH ,中国科学院动物研究所纯化冻干产品、 7-7.5mg/ 瓶、; FSH(Foiltropin) ,加拿大 Vetrepharm Cananda lnc 生产; EAZIBREEDCIDR( 1.9g Progesterone) , PfizerPty . Iimited 生产;氯前列烯醇 (PG , 0.2mg) ,上海市计划生育科学研究所生产;促排卵素 3 号 (LHRH-A3) ,宁波激素制品有限公司生产; 2 %利多卡因,泅水希尔康制药有限公司生产;移植枪、塑料硬外套、无菌软外套,法国卡苏公司生产;实体显微镜,日本 Olympus 公司; CL5500 胚胎冷冻仪,澳大利亚 Cytologic 公司生产; Millipore 超纯水仪,英国 Whattman 公司生产; 0.5-10 jxL 微量计量器,美国 Gilson 公司生产; 10-18 Fr 冲卵管,日本富士平公司生产; 35-60 塑料培养皿,瑞士 Nunc 公司生产;集卵杯 ( 侧漏式 ) ,日本富士平公司生产;集卵杯 ( 底漏式 ) ,法国卡苏公司生产。试验用无机盐试剂除特别说明外,均购自 Sigma 公司。

1.3 母牛超排处理方案

    本实验采用 FSH 逐次递减法进行超排处理。首先检查供体牛子宫及卵巢的状态,然后按表 1 的方案进行同期发情与超数排卵进行处理。

表 1 母牛超排处理方案  单位: ml

    在供体牛发情周期任意一天给供体牛埋植 CIDR ,以埋植 CIDR 当天为 0d ,第 5d 开始注射 FSH ,连续 4d 减量注射,第 7d 下午和第 8d 上午分别注射 PG 2 支,第 8d 下午撤栓,同时观察发情。在供体牛接受爬跨后第一次输精,之后约隔 12h 第 2 次输精,输精剂量比正常人工授精多 1 倍。试验组牛在第 1 次输精。以发情日计为 0d ,在第 17d 采用非手术法采卵。

    一个情期后,再按上述步骤再次超排同批西门塔尔母牛,对比两次超排的结果。

1.4 冲胚

    本试验采用 2 种冲胚方法。第一种方法为注射式冲胚,第二种为硬膜外腔麻醉的滴注式冲胚法,操作过程按卢全晟等( 2003 ) [3] 方法进行。

1.5 胚胎的采集与鉴定

    在供体牛发情配种后的第 7d ,用采卵管非手术采卵,在连续变倍体视镜下,按形态鉴定标准分为 A 、 B 、 C 3 个等级。其中只有 A,B 级可以冷冻保存, C 级胚胎一般用胚胎移植枪移植给受体母牛。 A 级胚胎形态典型,卵细胞和分裂球的轮廓清晰,细胞质致密,色调和分布极均一。 B 级胚胎与典型的胚胎相比,稍有变形,但卵细胞和分裂球的轮廓清晰,细胞质致密,分布均一,变性细胞和水疤不超过 10% ~ 30% 。 C 级胚胎形态有明显变异,卵细胞和分裂球轮廓稍不清晰或部分不清晰,细胞质不致密,分布不均匀,色调突起的水泡和变性细胞占 30% ~ 50% 。

    本实验中的可用胚胎指的是 A 级和 B 级 2 个等级的胚胎。

1.5 数据处理

    分别统计分析连续超排对母牛回收卵、可用胚胎、退化胚胎和未受精比率,试验数据统计结果用方差和 t 检验进行显著性检验。

2 结果与分析

2.1 西门塔尔牛第一次超排超排结果与分析

    本实验选择 6 头优秀西门塔尔母牛进行反复超排,第一次超排超排结果列于表 2 。由表 2 可见,超排 4 ~ 7 岁母牛( 07106 、 07112 、 07136 、 07140 、 07142 )比较获得的胚胎数,差异不显著( P>0.05 );而超排 4-7 岁母牛与超排 9 岁母牛( 07119 )获得的胚胎数比较,差异较显著( P<0.05 )。

表 2 西门塔尔母牛第 1 次超排处理反应
单位:枚

2.2 西门塔尔牛第二次超排超排结果与分析

    间隔 30d ,采用同样的超排处理方案,本实验对这批西门塔尔牛

表 3 西门塔尔母牛第 2 次超排结果与反应   单位:枚

 

表 4 西门塔尔母牛 2 次超排结果与反应的比较  %

 

注:上标不相同为差异显著 P<0.05 。

    相比(表 4 ),反复超排的西门塔尔母牛,两次超排结果的胚胎可用率差异不显著( P>0.05 ),在这 6 头牛中, 07136 和 07142 牛胚胎可用率与前一次超排在结果上差异显著( P<0.05 ), 4 头 ( 07106 、 07112 、 07119 、 07140) 与上次超排结果差异不显著( P>0.05 );而在退化胚胎率和未受精率上,两次超排的结果差异显著( P<0.05 )。

    本实验发现,西门塔尔母牛反复超排,对胚胎可用率没有显著变化或者是影响比较小(表 4 ),但第二次超排后胚胎退化率明显的增加,未受精率也升高( P<0.01 )。

    本实验注意到,重复超排后获胚总数略有下降( P>0.05 ),说明超排对西门塔尔母牛有一定的影响,造成这种现象的原因可能是:第一次超排后母牛的卵巢增大,黄体过多,虽然经过一个情期短时期的恢复,仍然有部分 母牛的卵巢没有完全恢复好。而且同一个体在不同时间对药品反映也会有一定差别,经过重复超排,母牛对药品的敏感度降低。

2.3 提高西门塔尔牛超数排卵率相关因素的探讨

    营养状况是影响供体母牛超数排卵的重要因素之一,郭志勤等 (2001) [2] 认为,中等膘情的供体牛超数排卵处理后可获得理想的排卵数,优于其它膘情的牛,本实验的结果证实了这一点,在本实验中,供试的西门塔尔母牛营养水平处于正 平衡、体质健康,超排时膘情中等。

    本实验采用综合措施以提高采胚率和可用胚率,尽量避免应激因素对反复超排结果的影响,收到较好的效果 , 如加强输精操作、输精时使用细且精致的输精器外鞘,减少子宫损伤;由输精操作熟练的技术人员输精;最后一次输精后 8 ~ 12h 用青霉素 160 万 IU 、链霉素 100 万 IU 溶液清宫等 , 这与何光中等( 2003 ) [10] 王洪宝等 (2003) [11] 吴亦芳等 (2004) [12] 刘俊平等 (2008) [13] 李树静等( 2001 ) [14] 所提出的技术措施和应用效果是一致的。

    超排处理本身对母牛是一次应激,而重复超排的母牛必须要有一个时期恢复,这个时间以 50 ~ 60d 为宜。重复超排间隔时间短,供体的生殖系统与激素调节不能完全恢复,重复超排效果不稳定;间隔时间长,则影响到母牛的利用率。

    本实验间隔 30d 后对西门塔尔母牛进行重复超排,获得一定的效果。限于条件,本研究仅对同一供体母牛进行了 2 次的重复超排,而连续多次重复超排的最佳时间间隔、激素处理方案等还有待于进一步探讨。

3 结论

    本实验在间隔 30d 对 6 头 4 ~ 9 岁的西门塔尔母牛进行重复超排,第一次超排获得胚胎 73 枚,可用胚胎 49 枚;第二次超排获得胚胎 69 枚,可用胚胎 45 枚。母牛经过一个情期的生殖与体况的恢复,其卵巢机能恢复到超排前的状态,这样重复超排,生产优质胚胎,可以提高优秀母牛胚胎的生产数量。

 

【责任编辑:婕子】

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